Основные особенности репаративной регенерации кожи в условиях применения хитозана

Основные особенности репаративной регенерации кожи в условиях применения хитозана

15.10.2013
14
Авторы:
Довгилева, О.М. Хомулло, Галина Васильевна Петрова, Маргарита Борисовна

Резюме

Современный этап изучения репаративных процессов связан с поисками новых стимулирующих факторов, ускоряющих заживление повреждений различных органов и тканей. В связи с этим особое значение приобретает использование в качестве стимуляторов регенерации кожи препаратов природного происхождения, которые, в отличие от синтетических, не приводят к различным побочным эффектам. Среди препаратов естественного генеза особое место занимает хитозан – уникальный природный полимер, получаемый из хитина ракообразных. Цель исследования – изучить микроскопические изменения при заживлении ран кожи у животных на всех этапах регенерации в условиях применения хитозана. Материал и методы Эксперименты выполнены на 83 беспородных белых крысах-самцах средней массой 152 г. Животные содержались в виварии в индивидуальных металлических клетках при одинаковом световом, температурном режимах и получали обычный рацион питания согласно установленным нормам. Все эксперименты выполнены в осенне-зимний период. Животных выводили из эксперимента под эфирным наркозом с соблюдением правил эвтаназии. Экспериментальные полнослойные кожные раны наносились однотипно всем животным. Операция проводилась под эфирным наркозом. На спине в межлопаточной области на участке, превышающем размеры бу дущей раны, вначале выстригался, а затем с помощью безопасной бритвы тщательно выбривался волосяной покров. На операционное поле, обработанное спиртом, прикладывался предварительно смоченный йодом трафарет квадратной формы со стороной, равной 1,5 см. По границе отпечатка ножницами вырезали лоскут кожи вместе с подкожной клетчаткой площадью 225 мм2. Заживление ран происходило открытым способом. Все животные делились на 2 серии. 1-я серия (контрольная) – на рану ежедневно наносилось вазелиновое масло. 2-я серия – раневая поверхность смазывалась 1% суспензией хитозана на льняном масле. Для этого 1 г хитозана молекулярной массой 26 000 (производство ЗАО «Биопрогресс») добавляли к 100 мл льняного масла (производство фирмы «Эколен», разрешено для медицинского применения) при помешивании на водяной бане. Полученный масляный раствор хранился в герметичном светонепроницаемом сосуде в сухом закрытом помещении при комнатной температуре. Соблюдение данных условий хранения необходимо потому, что на свету наблюдается потемнение хитозана, снижение его растворимости, а вследствие его гигроскопичности при повышенной влажности он может уплотняться [3, 8, 15]. Приготовленное вещество, предварительно подогретое и тщательно размешанное, наносилось на открытые полнослойные кожные раны с помощью пипетки. Для сравнительного анализа микроскопических изменений при репаративной регенерации кожи у крыс двух серий брались биоптаты краев раны через 5, 10 и 15 дней после повреждения. Для гистологических исследований с краев раны иссекались кусочки с участками неповрежденной кожи. Материал фиксировался в 10% нейтральном растворе формалина, обезвоживался в спиртовых растворах возрастающей концентрации и ксилоле, заливался в парафиновые блоки. Срезы толщиной 6-7 микрон окрашивались гематоксилин-эозином по методике Ван-Гизона и Маллори. Гистологические препараты изучались под световым микроскопом «ЛОМО МИКМЕД-1». С помощью окуляр-микрометра определялась величина новообразованных структур заживающей раны: высота струпа, лейкоцитарного вала, грануляционной ткани, пограничной зоны эпителия и протяженность эпителиального регенерата. Все количественные результаты экспериментов подвергались статистической обработке с применением стандартного пакета программ на персональном компьютере IBM-Pentium III - 500 по методике Microsoft EХCEl ХP (версия 7,0). Статистическую обработку полученных исследований проводили методами вариационной статистики, достоверность результатов оценивали с помощью t-критерия Стью-дента. Суммарная оценка скорости, характера и способа заживления основывалась на измерении площади открытой раневой поверхности и изучении гистологических изменений регенерирующих структур в условиях применения хитозана.
Скачать полный текст статьи
Скачать